喉鳞状细胞癌中STK15蛋白、BUBR1蛋白表达及相互作用的研究

张小盒 · 发表于 2014-12-9 16:40

目的：喉鳞状细胞癌(Laryngeal squamous cell carcinoma，LSCC)是东北地区常见的恶性肿瘤。已有文章报导了STK15基因扩增、过表达及BUBR1蛋白表达下调与喉癌发生发展密切相关。本研究通过免疫组化及免疫荧光双标实验方法进一步证实STK15、BUBR1蛋白表达与喉癌的相关性，以及探讨喉癌组织中STK15、BUBR1蛋白存在相互作用。
方法：40例喉癌组织标本及癌旁正常组织标本均来源于中国医科大学附属第一医院。患者为2006-2009年间的住院患者，均经病理诊断为喉鳞状细胞癌，均为首发病例，术前未经放疗和化疗。术后所取标本一组固定于4%多聚甲醛中，送交喉癌研究室制成蜡块。一组立即储存在-70℃冰箱中，待制备冰冻切片。
1.应用免疫组化实验（SP法）检测40例喉癌组织标本及癌旁正常组织标本STK15、BUBR1蛋白表达水平。40例喉癌组织及癌旁正常组织制作石蜡切片，经免疫组化染色，显微镜下观察，拍照，图片通过平均光密度值分析STK15、BUBR1蛋白表达水平。
2.应用免疫荧光双标判定STK15、BUBR1蛋白存在共定位。荧光染色切片在荧光显微镜下观察，荧光染色主要定位于细胞质及细胞核。STK15蛋白标记为红色荧光，BUBR1蛋白标记为绿色荧光。若两种标记重叠为黄色荧光，可认为两种蛋白共定位，存在相互作用。
3.统计学处理：应用SPSS 10.0统计软件，两样本均数t检验方法进行统计学分析处理。
结果：1.免疫组化结果分析。所得平均光密度值数据采用两样本均数比较t检验，应用统计软件SPSS10.0进行统计学分析。计算结果表明： p＜0.05，有统计学意义。可以认为STK15平均光密度值喉癌组＞癌旁组，BUBR1平均光密度值喉癌组＜癌旁组，即喉癌组织中STK15蛋白表达水平高于癌旁正常组织，而BUBR1蛋白表达水平低于癌旁正常组织。
2.免疫荧光双标结果分析。STK15蛋白和BUBR1蛋白均在细胞质及细胞核中表达。STK15蛋白标记为红色荧光，BUBR1蛋白标记为绿色荧光。两种标记重叠为黄色荧光。可以认为STK15和BUBR1两种蛋白共定位，提示可能存在相互作用。
结论：证实STK15蛋白高表达、BUBR1蛋白表达下调可能与喉癌的发生、发展相关。STK15蛋白、BUBR1蛋白可能存在相互作用共同影响喉癌的发生、发展，具体机制还需进一步研究。本研究希望能为有丝分裂检控点缺陷而导致染色体异倍体、诱发肿瘤发生的调节机制，提供新的可能途径。