有淋巴结转移声门上型喉癌的蛋白组学研究

张小盒 · 发表于 2014-12-9 16:38

【摘要】
目的  应用双向凝胶电泳技术对有淋巴结转移的声门上型喉癌组织进行了分析，以期发现与无淋巴结转移声门上型喉癌组织的蛋白表达差异，为进一步发现具有高敏感和特异性的声门上型喉癌转移诊断标志物以及喉癌转移机制提供理论依据。
方法  应用固相PH梯度双向凝胶电泳分离具有不同转移能力的声门上型喉癌组织总蛋白质, 银染显色  40%乙醇+10%冰乙酸固定30min; 30%乙醇+5%硫代硫酸钠敏化30min; 蒸馏水洗涤三次，每次5min; 2.5% 无水碳酸钠+0.074%甲醛显影至蛋白质斑点清晰为止；1.46%EDTA二钠终止10min; 蒸馏水洗涤10 min; 以30%乙醇+4.6%甘油保存。Imagescanner扫描银染的凝胶，Inagemaster图像分析软件依次进行点检测、背景消减，建立3次重复实验的平均凝胶，匹配，量化获取斑点的相关信息等分析。获得蛋白质的分子量及等电点与网上http://www.expasy.ch双向凝胶电泳图谱对比分析。行银染色,Image master 2D软件分析所获得的双向凝胶电泳图谱,找出差异表达的蛋白质点。
结果  在相同条件下对有淋巴结转移及无淋巴结转移喉癌组织蛋白质分别进行了3次双向凝胶电泳，使用Inagemaster图像分析软件建立了有淋巴结转移及无淋巴结转移喉癌的2-DE图谱的平均胶，有淋巴结转移喉癌平均胶有（270±30）个蛋白质点，无淋巴结转移喉癌平均胶有（280±35）个蛋白质点，两块平均胶的匹配率为91%，获得分辨率和重复性均较好的双向凝胶电泳图谱,发现有25种蛋白可能与声门上型喉癌淋巴结转移有关；与无淋巴结转移喉癌相比，有20种蛋白质在有淋巴结转移喉癌中表达上调,5种蛋白质表达下调。
结论  利用固相PH梯度凝胶双向电泳技术，建立了有淋巴结转移的声门上型喉癌蛋白质组表达图谱，有淋巴结转移的声门上型喉癌与无淋巴结转移声门上型喉癌蛋白质表达存在明显差异,这些筛选出的蛋白质可能与声门上型喉癌淋巴结转移发生机制有关。