Math1介导的耳蜗支持细胞转分化为再生毛细胞的变化过程

张小盒 · 发表于 2014-12-2 19:53

目的：本研究旨在诱导耳蜗支持细胞转分化为毛细胞，着重观察在math1基因的诱导下支持细胞转分化为毛细胞的形态学变化过程。并且在变化过程中对正常毛细胞与新生毛细胞进行比较。从而进一步研究Math1介导的耳蜗支持细胞转分化为再生毛细胞的机制。
方法：新生SD大鼠（P3），将基底膜取出分段置于无血清DMEM/F12+B27培养基培养。将所培养基底膜分为对照组（不加入腺病毒）和实验组（加入腺病毒Ad5-EGFP-math1）。对于实验组，培养第二天采用腺病毒Ad5-EGFP-math1将math1基因导入基底膜，按math1过表达后1day, 2day, 3day, 5day, 7day, 10day将其分为6组，每组6个耳蜗；对照组除不加病毒外，其余与实验组相同。在math1过表达后1day, 2day, 3day, 5day, 7day, 10day将标本进行多聚甲醛固定，进行免疫荧光染色。对于标记增殖标记物Brdu, 则需将终浓度为10ug/ml的Brdu与耳蜗基底膜共孵育。所标记抗体分别为myosinVIIA, Brdu, 以及Phaloidin染色。
结果： 1）实验组中从加入病毒后3day, 5day, 7day, 10day组，除了正常的四排内外毛细胞，在小上皮嵴区域（外沟细胞区域）即出现了myosinVIIA阳性的具有毛细胞形态的异位新生毛细胞。而对照组的所有组的所有耳蜗仅能标记到正常位置的正常毛细胞myosinVIIA阳性。 2）实验组中从加入病毒后3day, 5day, 7day, 10day四组中的异位新生毛细胞，10day组的多于7day, 7day组多于5day组，5day组多于3day组，差异有统计学意义（P<0.01）。3）加入病毒后5day新生的毛细胞具有成簇状的，不规则的，散开的纤毛，非“一字形”，非“V字形”。4）新生毛细胞Brdu为阴性，为支持细胞转分化而来而非增殖而来。
结论： math1的过表达能成功的诱导支持细胞转分化为新生毛细胞，并且在加入病毒的第三天就出现了异位新生的毛细胞，并且逐渐增多。新生的毛细胞与正常的毛细胞形态相似且共同的具有纤毛并异于支持细胞。新生毛细胞来源于支持细胞并有由支持细胞转分化而来而非增殖而来。
关键词：腺病毒， Ad5-EGFP-math1，支持细胞，新生毛细胞，转分化。